小儿咳喘灵颗粒具有宣肺、清热，止咳、祛痰、平喘功效。用于上呼吸道感染、气管炎、肺炎、咳嗽等。由麻黄、金银花、苦杏仁、板蓝根、石膏、甘草、瓜蒌7味处方组成^[1]。现行标准为部颁标准第四册及18个企业注册标准。中药制剂的活性成分含量高低是反映其有效性的重要指标，部颁标准第四册未对其进行控制，部分注册标准即使对金银花的含量进行了测定，也存在提取方法、色谱条件、限度规定差异较大和指标单一的问题。为达到对多味药材、多个活性成分的有效控制，有必要统一采用HPLC法，开展金银花(绿原酸、木犀草苷)、甘草（甘草苷）、板蓝根（R，S-告依春）的含量测定^[2-8]，以达到更有效地控制产品质量，保证临床用药安全有效的目的。

1 仪器与试药

仪器：Waters 2695-2996 HPLC高效液相色谱仪，PDA检测器。

试药：乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

对照品：R，S-告依春、绿原酸、甘草苷、木犀草苷（供含量测定用；批号分别为：111753-2010304、0753-9910、111610-201106、111720-200602；含量分别为：99.9%、100%、93.7%、100%），均购于中国食品药品检定研究院。

样品：小儿咳喘灵颗粒（批号：15021337，神威药业集团有限公司）及2015年国家计划抽验样品小儿咳喘灵颗粒210批。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：迪马Inertsil C8-3柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；以乙腈为流动相A，0.5%乙酸溶液为流动相B，按表 1中的规定进行梯度洗脱；检测波长：DAD检测器，木犀草苷（327 nm）、绿原酸（327 nm）、甘草苷（276 nm）、（R，S）-告依春（245 nm）；流速：0.6 mL·min^-1；理论板数按木犀草苷峰计算应不低于20000。

2.2 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取5 g，精密称定，精密加入70%甲醇20 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

取R，S-告依春、绿原酸、甘草苷、木犀草苷对照品适量，精密称定，分别加70%甲醇制成每1 mL含20、100、100、20 µg的溶液，即得。

2.4 专属性试验

分别取处方中除金银花、甘草、板蓝根外的全部药味，按本品制法及供试品溶液的制备方法分别制备金银花、甘草、板蓝根阴性对照溶液，注入液相色谱仪进行测定，结果表明：阴性对照溶液无干扰，专属性良好，见图 1~6。

2.5 线性关系考察

精密吸取R，S-告依春（0.01704mg·mL^-1）、绿原酸（0.1928 mg·mL^-1）、甘草苷（0.2056 mg·mL^-1）、木犀草苷（0.0167mg·mL^-1）对照品溶液，按不同进样量依法测定，以峰面积值（A）为纵坐标、进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线，分别测得回归方程：

$ {y_{{\rm{R,S}} - 告依春}} = 1.995 \times {10^7} + 69661,\;\;r = 0.9999 $

$ {y_{绿原酸}} = 5.176 \times {10^6} + 17472,r = 0.9999 $

$ {y_{甘草苷}} = 2.9701 \times {10^6} + 89647,r = 0.9999 $

$ {y_{木犀草苷}} = 3.3438 \times {10^6} + 8945,r = 0.9999 $

结果表明，R，S-告依春在0.00341~0.1704µ g、绿原酸在0.03856 ~ 1.928 µ g、甘草苷在0.04112 ~ 2.056 µ g、木犀草苷在0.00334~0.167 µg，有良好的线性关系，见表 2。

2.6 精密度考察

取同一供试品（批号：15021337）溶液，同一进样量，连续进样5次，结果平均峰面积分别为942819、5367676、2379660、161919.8，RSD分别为0.19%、0.55%、0.51%及0.27%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性考察

取同一供试品（批号：15021337）溶液，分别于配制后0、5、10、12、24 h，测定峰面积，峰面积平均值分别为938111.8、5267222、2365475、160802，RSD分别为0.33%、0.82%、0.67%及0.58%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性考察

按拟订含量测定方法，对同一批号（批号：15021337）的6份样品进行平行试验，测定结果表明该方法的重复性良好，见表 3。

2.9 加样回收率试验

采用加样回收法，取上述重复性试验所用的样品（批号15021337）2.5 g（9份），精密称定，分别精密加入一定量对照品，按拟定含测方法制备，依法测定，计算回收率，结果见表 4~7。

2.10 样品的测定

依法对210批次样品进行测定，测得结果见表 8。

2.11 检测限与定量限考察

根据R, S-告依春、绿原酸、甘草苷、木犀草苷标准溶液S/N=3及S/N=10时的溶液浓度，分别计算出4种成分的检测限和定量限，结果见表 9。