四环素类抗生素为广谱抗菌药，被广泛作为药物添加剂应用于饲料中，用于预防和治疗畜禽疾病。但由于该类药物的不合理使用及滥用，容易导致在牛奶及奶粉中四环素类药物的残留问题^[1-3]。为保障民众饮食健康，自三聚氰胺事件以来，我国加强了对奶粉及相关奶制品的监管力度。为适应食品监管需求，有必要加强检测质量的评价和推进相关检验检测能力。相关食品中四环素的检测是一种日常监管的重要技术监测内容，其测定能力和准确性，也反映出了检测机构的基本检验能力和水平。

实验室能力验证是通过实验室间检测结果的比对来确定实验室能力的活动。目前，能力验证已经成为评价实验室技术能力的重要手段，也是实验室内部质量控制的有效补充^[4-5]。能力验证组织方应确保计划实施中出现的不满意结果并非源于样品本身的原因。因此，对能力验证样品的均匀性和稳定性评价是能力验证计划中的一项重要环节^[6]。本文概述了由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）与中国食品药品检定研究院（以下简称“中检院”）质量管理处共同组织，中检院食品检定所理化检测室负责实施的能力验证项目NIFDCPT-072的主要工作，并对离群值进行了技术分析，以期为管理部门评价实验室资源提供参考，并促进相关实验室提高技术水平和质量管理能力。

1 研究内容 1.1 能力验证样品 1.1.1 样品制备

委托汇智泰康实验室生产样品共300瓶，样品为粉末状，样品中四环素含量约100 mg·kg^-1。样品采用玻璃瓶带硅胶密封垫塑料盖包装，每瓶不少于10 g，密封，标记，常温保存。

1.1.2 均匀性检验

从分装好的样品中各随机抽取15份样品进行均匀性考察，每瓶样品重复测定2次，每次都单独取样，采用单因子方差分析（one way ANOVA）判定样品均匀性。

1.1.3 稳定性检验

在样品实际储存状态下，分别在均匀性检验完成后的4、8周和发样前各随机抽取3瓶样品进行测定，测定结果与均匀性结果比较，时间覆盖整个计划周期，采用t检验法考察样品的稳定性。

1.2 检测方法

不限定方法，推荐采用GB/T 22990-2008^[7]规定的方法，也可采用实验室日常使用的其他方法，在结果报告中注明。

1.3 结果评价原则

参见CNAS-GL02《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》^[8]，采用稳健中位统计技术，所有参加者结果的中位值作为指定值，标准化四分位距（NIQR）作为能力评定标准差，对四环素测定结果计算Z比分数。∣Z∣≤ 2为满意结果；2＜∣Z∣＜3为“可疑”结果，鼓励实验室复查；∣Z∣≥ 3为“离群”结果，要求开展纠正措施。

2 结果与分析 2.1 样品均匀性和稳定性考察结果

按照CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》^[9]的要求，采用单因素方差分析法对样品进行均匀性检验。当测定结果的F值＜Fα(γ1, γ2) 时，才认为样品是充分均匀的。本次能力验证测试样品均匀性检验的F值=2.26，小于临界值[F_0.05(14, 15)=2.42]，表明在P＜0.05显著性水平时，测试样品中的四环素是均匀的。测试结果表明样品内和样品间均无显著性差异，样品是均匀的。将4次稳定性数据进行t检验，t值均小于95%置信区间查表值，表明样品在本计划运作期间测试样品中的四环素是稳定的。

2.2 参加实验室概况

本次能力验证共向22家实验室发放了样品，其中除1家实验室由于自身原因退出外，其余21家实验室按要求反馈了结果。21家实验室分布于16个省份，分布情况为四川省3家，贵州省、辽宁省及甘肃省各2家，其他14个省份各1家。食品药品检验机构共有19家，占参加者数量的90.5%，其中8家为省级食品药品检验机构，11家为地市级食品药品检验机构；其余2家为第三方检测机构。参加单位名单见表 1。

2.3 回收数据的总体分布特征

本次能力验证共收回21个实验室的检测结果，统计测定结果数据的频数，根据浓度分组及频数绘制直方图并进行正态拟合，见图 1。本次能力验证回收的检查结果基本服从正态分布，可以用基于正态分布的稳健中位统计技术进行数据分析^[10-11]。

2.4 检测结果总体统计量和结果评价

对本次能力验证的总体情况进行了统计，包括中位值、标准四分位数间距（NIQR）、稳健变异系数、最大值、最小值和极差等，详见表 2。

应用稳健统计分析方法，计算各反馈结果实验室的实验室Z比分数。各参加实验室Z比分数分布结果见图 2。反馈结果的21家实验室中，20家实验室的结果为满意结果，1家结果为可疑，满意率为95.2%。检测结果总体情况见表 3。

3 结论讨论 3.1 检测方法的选择

本次能力验证推荐了检测方法，但没有规定必须使用推荐方法。根据反馈的结果和相关记录，21家参加实验室均采用了推荐方法，使用高效液相色谱法进行测定，未见使用高效液相色谱-质谱法（LC-MS）的实验室。参加能力验证的实验室统计使用的液相色谱仪品牌共5种，检测方法的选择未造成测定结果的偏离。

3.2 可疑结果的技术分析

在pH 2~6条件下，四环素的C-4位二甲氨基很容易发生可逆反应的差向异构化，生成差向异构体^[12]，因此，在进行标准溶液配制及样品溶液的提取时，应现用现配和及时测定。标准溶液的配制及样品处理的时间可能是造成结果差异的原因。

在检测方法GB/T 22990-2008中，样品前处理需要进行2次固相萃取操作，对实验人员的实验能力要求较高，在固相萃取过程中的操作误差可能也是导致结果差异的来源之一。在试验中增加随行回收率试验，采用基质相近的有证标准物质或试样加标，以考察检测方法的整体准确性，降低试验误差^[13-15]。

3.3 技术建议

此次能力验证中95.2%的实验室结果为“满意”，少数实验室提交的检测结果不够理想，说明参加本次能力验证的大多数实验室在进行乳粉中四环素检验时能够满足测定结果的重现性和准确性的要求。结果不理想的相关实验室需按照CNAS的有关规定，认真追溯试验过程，查找偏离的原因，完善自己的检测能力，将实验误差和不确定度控制在最小范围内。