2019, Vol. 33 
药用丁基橡胶塞作为常见的药品包装材料之一, 广泛应用于各类口服及注射剂产品。在橡胶制造过程中, 会加入多种配合剂, 以改善加工性能、提高生产效率、改善产品使用性能等。在诸多配合剂中, 硫化剂及抗氧剂是较为常见的两种。硫化剂, 即可引起橡胶分子链发生交联反应的物质, 可分为硫磺硫化体系及非硫磺硫化体系, 溴化丁基硫化活性高, 硫化体系的选择范围较广, 通常选用硫磺硫化体系, 以提高生产效率, 降低成本。为抑制橡胶产品在使用过程被氧化, 在生产过程中通常加入抗氧剂, 常见的抗氧剂主要有胺类、酚类等; 其中最为常见的酚类抗氧剂为抗氧剂264, 近年来, 也有企业采用抗氧剂1010、抗氧剂1076等添加至胶塞中。
在测定胶塞中硫化剂及抗氧剂时, 可采用多种方法, 如气相色谱法及液相色谱法等, 本研究参考了相关文献[1-5], 采用高效液相色谱法, 对胶塞中的硫化剂及抗氧剂同时进行测定, 经方法学验证及样品检验, 此方法简便、准确、可行, 可用于同时测定胶塞中硫磺类硫化剂及酚类抗氧剂1010。
1 仪器与试药Waters 2695液相色谱仪及2996二极管阵列检测器(美国沃特世公司), MARS微波萃取仪(美国CEM公司)。
甲苯(国药集团化学试剂有限公司), 甲醇(国药集团化学试剂有限公司), 纯水(Milli-Q纯水仪制), 乙腈(默克公司), 四氢呋喃(默克公司), 升华硫(国药集团化学试剂有限公司), 抗氧剂1010(Aldrich公司)。
注射用冷冻干燥用溴化丁基橡胶塞(A公司, 批号:B505124798), 注射用重组抗HER2人源化单克隆抗体(B公司, 批号:801、802、803, 储存条件:避光, 2~8℃保存)。
2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱:Sunfire-C18(4.6 mm×150 mm, 5 µm), 柱温:35℃, 流动相:乙腈-四氢呋喃-水(6:3:1), 流速:1.5 mL·min-1, PAD检测器检测波长:280 nm, 进样量:20 µL。
2.2 对照品溶液的制备精密称取升华硫及抗氧剂1010各50 mg, 置100 mL量瓶中, 以甲苯-甲醇(2:3)溶液溶解并稀释至刻线, 摇匀, 即得混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 2.3.1 胶塞中硫化剂及抗氧剂提取试验供试品溶液制备取胶塞适量, 剪碎, 精密称取2 g, 置微波萃取罐中, 精密加入20 mL甲苯-甲醇(2:3)溶液, 于105℃微波萃取30 min, 萃取液经0.45 µm的滤膜过滤后, 即得供试品溶液, 同法制备空白溶液。
2.3.2 胶塞中硫化剂及抗氧剂迁移试验供试品溶液制备将样品于温度25℃、湿度60%的条件下, 倒置放置0、3、6个月后, 分别取各批药品2瓶, 分别注入10 mL去离子水复溶, 将溶液以重力速度通过事先用甲醇4 mL及水4 mL活化的固相萃取柱后, 以甲醇2 mL及甲苯-甲醇(1:1)溶液4 mL洗脱至10 mL量瓶中, 然后以甲苯-甲醇(1:1)溶液定容至刻度, 即得供试品溶液。
2.4 标准曲线的建立精密吸取"2.2"节下制备的混合对照品溶液适量, 以甲苯-甲醇(2:3)溶液依次稀释成硫化剂、抗氧剂1010浓度分别为0.5、0.25、0.13、0.06、0.03、0.02、0.008、0.004 mg·mL-1的系列混合对照品溶液。分别注入液相色谱仪, 记录色谱图, 以浓度及峰面积进行线性回归, 硫化剂回归方程:y=17984095x+582 r=0.9996(n=8), 抗氧剂1010回归方程:y=4113103x+7320 r=0.9999 (n=8), 表明二者在0.004~0.5 mg·mL-1的范围内线性良好。
2.5 精密度试验分别吸取浓度为0.13、0.03 mg·mL-1的混合对照品溶液各20 µL, 连续注入液相色谱仪5次; 各浓度下峰面积RSD均小于2.0%, 表明精密度良好。
2.6 稳定性试验分别吸取浓度为0.13、0.03 mg·mL-1的混合对照品溶液各20 µL, 在0 h和24 h分别注入液相色谱仪; 各浓度下峰面积RSD均小于2.0%, 表明硫化剂升华硫及抗氧剂1010在24 h内测定结果稳定。
2.7 回收率试验 2.7.1 胶塞中硫化剂抗氧剂提取回收率试验取胶塞适量, 剪碎, 精密称取2 g, 置微波萃取罐中, 精密加入含有不同浓度硫化剂及抗氧剂的20 mL甲苯-甲醇(2:3)溶液, 于105℃微波萃取30 min, 萃取液经0.45 µm的滤膜过滤后, 即得。经计算, 硫化剂回收率范围为91.75%~94.83%, 平均回收率为92.9%, RSD为1.5%;抗氧剂回收率范围为102.05%~111.55%, 平均回收率为108.3%, RSD为3.7%。见表 1和表 2。
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表 1 硫化剂提取回收率试验结果 |
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表 2 抗氧剂1010提取回收率试验结果 |
取各批药品2瓶, 分别注入10 mL去离子水复溶, 将复溶后的药液及含有不同浓度硫化剂及抗氧剂的甲苯-甲醇(2:3)溶液适量, 以重力速度通过事先用甲醇4 mL及水4 mL活化的固相萃取柱后, 以甲醇2 mL及甲苯-甲醇(1:1)溶液4 mL洗脱至10 mL量瓶中, 后以甲苯-甲醇(1:1)溶液定容至刻度, 即得。经计算, 硫化剂回收率范围为98.68%~106.63%, 平均回收率为102.6%, RSD为2.3%;抗氧剂回收率范围为98.92%~110.70%, 平均回收率为105.5%, RSD为3.3%。见表 3和表 4。
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表 3 硫化剂迁移回收率试验结果 |
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表 4 抗氧剂1010迁移回收率试验结果 |
取不同浓度的硫化剂及抗氧剂标准溶液注入液相色谱仪, 记录色谱图, 当信噪比为3时为检出限, 信噪比为10时为定量限, 经计算, 升华硫检出限为2.7 ng, 定量限为7.9 ng; 抗氧剂1010检出限为11.8 ng, 定量限为27.6 ng。
2.9 试验结果胶塞中硫化剂及抗氧剂提取试验结果见表 5, 典型色谱图见图 1、图 2。
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表 5 胶塞中硫化剂及抗氧剂含量 |
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1.硫化剂; 2.抗氧剂1010。 图 1 硫化剂及抗氧剂对照品液相色谱图 |
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1.硫化剂; 2.抗氧剂1010。 图 2 注射用冷冻干燥用溴化丁基橡胶塞中提取的硫化剂及抗氧剂液相色谱图 |
胶塞中硫化剂及抗氧剂迁移试验结果见表 6, 典型色谱图见图 3~图 5。
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表 6 硫化剂及抗氧剂迁移试验结果 |
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图 3 加速放置0个月后的注射用重组抗HER2人源化单克隆抗体中迁移的硫化剂及抗氧剂液相色谱图 |
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图 4 加速放置3个月后的注射用重组抗HER2人源化单克隆抗体中迁移的硫化剂及抗氧剂液相色谱图 |
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图 5 加速放置6个月后的注射用重组抗HER2人源化单克隆抗体中迁移的硫化剂及抗氧剂液相色谱图 |
1) 药品基质干扰, 在对某些非极性药品进行考察时, 如丙泊酚注射液, 因药液极性与硫化剂较为接近, 本色谱条件下检测硫化剂会受到样品干扰, 色谱图见图 6所示, 此情况下, 可采用其他硫化剂检测方法[6], 以避免干扰。
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1.硫化剂; 2.抗氧剂1010。 图 6 丙泊酚注射液中迁移的硫化剂及抗氧剂液相色谱图 |
2) 提取方法, 本文所用提取溶剂极性更小, 更易溶解硫化剂, 较原先研究[6]所用无水乙醇, 可有效提高溶解性。
3) 胶塞中较为常见且有一定风险的添加剂主要为硫化剂、抗氧剂、硫化活性剂及残留溶剂等挥发性小分子成分, 当胶塞生产厂家未提供具体可提取物信息时, 需要在开展相容性研究时进行较为全面的可提取物试验, 以考察胶塞中可能含有的各种性质的添加剂, 确定考察对象, 并选择适宜的方法开展相关研究。
4) 本文建立的方法, 不仅可用于测定硫磺硫化剂与抗氧剂1010, 此方法及色谱条件下还可同时测定抗氧剂1076、抗氧剂330及抗氧剂168, 典型色谱图见图 7, 此方法可用于筛查胶塞中所用的硫化剂及抗氧剂种类并对其进行测定, 方法准确、简便。
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1.硫化剂; 2.抗氧剂1010;3.抗氧剂330;4.抗氧剂1076;5.抗氧剂168。 图 7 硫化剂及4种抗氧剂液相色谱图 |
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