肌酸激酶（creatine kinase，CK）是一个与细胞内能量转运、肌肉收缩以及三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate，ATP）再生直接关联的激酶。体内有四种同功酶形式：肌肉型（MM）、脑型（BB）、杂化型（MB）和线粒体型（MiMi）。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。在临床疾病诊断中，血清CK浓度检测常用于肌肉萎缩和心肌梗塞等疾病的诊断^[1-2]。乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase，LDH）是一种糖酵解酶，存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。LDH常联合CK-MB、肌红蛋白以及肌钙蛋白等检测用于心肌梗死的诊断^[3]。血清肌酐（serum creatinine，CRE）和血尿素（blood urea，UREA）水平是肾脏毒性的常规检验指标，常常联合肾毒性早期标志物胱抑素C的检测对肾脏损害的程度进行评价^[4]。目前，这4项指标都在药物安全性评价研究中得以广泛应用，来检测药物在实验动物体内的毒性作用。实验室对这些指标的检测能力直接影响药物的毒性评价结果，从而对能否进一步研发这些药物产生重要影响。为了评价各检测实验室检测这4项指标的准确性和可比性，促进检验能力提高，故开展了本次能力验证研究。

能力验证（proficiency testing，PT）是利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加实验室的检测能力^[5]。能力验证组织者必须是经过CNAS认可的合格的能力验证提供者，并按照能力验证的相关指南开展能力验证研究^[6-7]。本研究由中国食品药品检定研究院组织，由安全评价研究所负责实施。本文总结了本次能力验证研究的相关内容，并对不满意结果进行了分析，为实验室采取纠正措施，促进质量改善以及监管部门评价实验室检测能力提供参考依据。

1 材料与方法 1.1 材料

能力验证样品为市售的某品牌高、低2个浓度的血清冻干粉，批号分别为875UE和1144UN，有效期至2020年7月。

1.2 仪器与试剂

HITACHI 7180型全自动生化分析仪（日本日立公司）；HB-RO/60制水机（杭州惠邦净水设备有限公司）；IGS60通用型培养箱（美国Thermo公司）；P1000 Gilson移液枪（美国吉尔森公司）；CK试剂和校准品、LDH试剂和校准品、UREA试剂和校准品以及CRE试剂和校准品，均购自日本和光纯药工业株式会社。

1.3 试验方法 1.3.1 样品制备及发放

对高、低2个浓度的血清冻干粉进行均匀性和稳定性检验，结果符合要求后，再分装成5个样品瓶，即1号（低）、2号（高）、3号（低）、4号（高）和5号（高），4 ℃冷藏保存。运输时将样品瓶放入塑料泡沫盒中，内置冰袋冷藏运输。使用时，每瓶加入5 mL去离子水，室温放置30 min，混匀、配制成上机样品。

1.3.2 均匀性和稳定性检验

依据CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》，对高、低浓度能力验证样品的均匀性和稳定性进行检验，检验结果符合要求后，再进行标记^[8]。采用单因素方差分析法（F检验）对样品进行均匀性检验。稳定性检验是以均匀性检验测定结果作为第1次稳定性数据，分别对室温条件保存8 d的样品、模拟运输条件保存7 d的样品以及在温度37 ℃加速试验条件下保存16 h的样品进行检测，采用t检验法判定样品的稳定性。

1.3.3 数据统计方法和能力评价方法

随机抽样、均匀性和稳定性数据分析以及能力验证结果均采用SPSS19.0软件进行分析。通过单样本Kolmogorov-Smirnov检验进行能力验证结果数据的正态性检验，设置显著性水平P＜0.05。

按照CNAS-GL02《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》的评价原则以及美国临床实验室改进法案（CLIA’88）中生化指标的质量分析要求，制定本研究的评价标准，如表 1所示。依据美国病理学家学会（College of American Pathologists，CAP）组织的生化指标能力验证的评价要求，每个指标分配5个样品，一个样品通过记20分，得分大于或等于80分判定为该指标评价结果满意^[9-10]。

2 结果 2.1 样品均匀性和稳定性考察结果

按照随机化原则，随机抽取高、低浓度样品各10瓶，混匀后每瓶再分装成2份，随机测定20次，对结果进行单因素方差分析，当F值＜F_α（v₁, v₂）时，判定样品均匀分布^[8]。研究中高、低浓度样品的各指标检验F值＜F_α（9，10），样品是均匀的分布，能满足本次能力验证的要求，均匀性检验结果如表 2和表 3所示。

随机抽取高、低浓度样品各6瓶，将样品在温度37 ℃培养箱中放置16 h，进行加速稳定性研究。随机抽取高、低浓度样品各6瓶，按照实际运输时的要求进行包装后，放置在室外环境中7 d，进行运输条件下的稳定性研究。随机抽取高、低浓度样品各6瓶，放置在室温环境中8 d，进行室温条件下的稳定性研究。当t检验P＞0.05时，判断样品稳定。研究结果显示，3种条件下高、低浓度样品的t检验P值都大于0.05，样品的稳定性符合能力验证的要求，稳定性检验结果如表 4所示。

2.2 能力验证结果评价 2.2.1 参加实验室的基本情况

本研究共有43家实验室参加，43家实验室分布于18个省、自治区或直辖市，分布情况如表 5所示。并向这43家实验室发送了能力验证样品，回报CK、LDH、UREA和CRE结果的分别有40、32、41和43家。

各参加实验室检测CK、LDH和UREA均分别采用了相同的检测方法，CK和LDH均采用速率法，UREA采用尿素酶法。CRE的检测方法有酶法和苦味酸法两种，分组进行统计分析和评价。37家实验室的生化分析仪器为国外品牌，6家为国产品牌。

2.2.2 数据正态性检验及统计量结果

对能力验证结果数据进行单样本KolmogorovSmirnov检验，P＞0.05时，数据成正态性分布，P值小于或等于0.05时，数据成非正态性分布。结果显示，所有指标的Kolmogorov-Smirnov检验P值均大于0.05，数据成正态性分布。5个样品的能力验证结果的统计量如表 6所示。

2.2.3 评价结果

4个指标均出现不满意的结果，评价结果如表 7所示。

3 讨论

在本研究制定评价标准时，参照了美国临床实验室改进修正法案（CLIA’88）、美国病理学家学会以及中国卫生行业标准《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》（WS/T 403-2012）对这4项指标的质量要求，这保证了评价标准的科学性、权威性和适用性^[11]。

CRE有酶法和苦味酸法两种测定方法，当CRE浓度处于较低或中等水平时，由于干扰物的影响，苦味酸法测定的结果偏高。而当CRE浓度较高时，由于受到线性检测限的影响，苦味酸法测定的结果偏低^[12]。本研究中CRE浓度范围覆盖了高低水平，为了更客观真实地评价实验室的检测水平，避免因方法学不同所导致的误判，因此，将两种检测方法分为两组分别统计分析和评价。各实验室检测CK、LDH和UREA的方法都相同，因此，未进一步分组。本研究中实验室数量为43家，但所用仪器品牌或型号却多达25种，因此，也没有按照仪器品牌或仪器型号进行分组评价。

研究中的4项指标，只有CRE是所有实验室均开展的项目，其余项目均没有全部开展。所有指标均出现不满意结果，多种因素可以导致结果不满意，比如仪器未校准、检测参数设定错误、试剂浓度变化、人员操作以及机械方面的因素等。

实验室应查找不满意结果发生的具体原因，并采取纠正措施。实验室还可以申请测量审核进行再次评价，直至评价结果满意。否则，实验室的检测结果不准确、不具有可比性，也无法通过监管部门的实验室认证或审查。