生脉注射液的处方源自古方“生脉散”，由红参、麦冬、五味子三味中药提取精制而成，具有益气养阴、复脉固脱的功效^[1]。方中红参和麦冬均含有大量的糖类成分^[2-6]，原国家食品药品监督管理总局《关于开展中药注射剂安全性再评价工作的通知》中，要求“注射剂中所含成分应基本清楚，应对注射剂总固体中所含成分进行系统的化学研究” ^[7]；因此，有必要对本品中糖类成分含量加以测定。目前，单个糖类成分的含量测定主要采用高效液相色谱-蒸发光散射法^[8-10]和高效液相色谱-示差折光（HPLC-RID）法^[11-13]。中药注射剂成分复杂，不同种类的糖保留时间接近，难以有效分离，其他高极性成分也可能会干扰测定。超高效液相色谱（UPLC）技术具有分析时间短、分离度好、灵敏度高、溶剂消耗少等优点，尤其适用于中药的检测和分析^[14-16]。本文以生脉注射液为例，首次采用UPLC-ELSD技术建立了中药注射剂中糖类成分的快速测定方法，为该品种的质量控制和化学物质基础研究提供了实验基础，也为中药注射剂的再评价工作提出了参考和示范。

1 仪器与试药 1.1 仪器

Waters ACQUITY UPLC液相色谱系统，配有ACQUITY ELSD蒸发光散射检测器；METTLER AE240百万分之一电子天平。

1.2 试药

7批生脉注射液由3个生产企业提供。D -果糖（批号111504-200001）、D-葡萄糖（批号110833-200503）、蔗糖（批号111507-200001）、麦芽糖（批号100287-200701）对照品均来自中国食品药品检定研究院。色谱纯乙腈购于Merck公司；分析纯三乙胺购于北京化学试剂公司；水为超纯水。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH Amide（2.1 mm × 150 mm，1.7 μm），柱温：35 ℃。流动相：乙腈（含0.2%三乙胺）-水（75:25），流速0.2 mL·min^-1。漂移管温度55 ℃，氮气压力40.0 psi，增益100，数据率2 pps，冷却模式。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖和麦芽糖对照品适量，加50%乙腈制成每1 mL分别含5、0.7、1、0.7 mg的溶液，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品1 mL，置25 mL量瓶中，加50%乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 测定法

精密吸取对照品溶液2 μL、5 μL和供试品溶液2 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”节下条件测定，以进样量对数值为横坐标，峰面积对数值为纵坐标，绘制线性方程，用于含量测定。

2.5 方法学考察 2.5.1 线性关系试验

取混合对照品溶液，加50%乙腈逐级稀释得系列对照品溶液，以进样量的对数值为横坐标，峰面积的对数值为纵坐标绘制标准曲线，结果显示各糖线性关系良好，回归方程、线性范围和相关系数见表 1。

2.5.2 精密度试验

取同一供试品溶液，连续测定6次，各糖峰面积RSD均小于3.0%，结果见表 2。

2.5.3 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、16 h进样测定，各糖峰面积RSD均小于3.0%，见表 3。

2.5.4 重复性试验

取同一批样品，平行制备6份供试品溶液，进样测定，计算各糖含量，RSD均小于3.0%，见表 4。

2.5.5 回收率试验

精密量取已知含量的本品0.2 mL于10 mL量瓶中，精密加入混合对照品溶液1.3 mL，加50%乙腈稀释至刻度，摇匀，即得加样回收溶液，平行制备6份，进样测定，计算回收率，各糖回收率均在95.0%~105.0%，RSD均小于3.0%，见表 5。

2.6 样品测定

取生脉注射液，依法测定，结果见表 6。对照品和供试品溶液色谱图见图 1。

3 讨论

生脉注射液中糖类成分为单糖和双糖，以果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖为主，其中果糖含量最高，占4种糖总和的60%左右。笔者还对上述糖类成分的来源进行了研究，结果显示果糖和葡萄糖主要来自麦冬水煎煮液，蔗糖和麦芽糖主要来自红参醇提液，五味子水煎煮液中也含有少量果糖。7批样品总糖含量在24.14~52.77 mg·mL^-1，差异显著，建议加强麦冬和红参原料的质量控制，规范和固化产地、采收时间、加工工艺等因素，提高成品的均一性。