胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）是一种单链多肽，由70个氨基酸残基组成^[1]。IGF-Ⅰ能介导生长激素的大部分作用，促进生长和合成代谢^[2-5]，且有降低血糖、调节免疫、调节骨细胞功能和代谢的作用^[6-9]。在体内，生长激素（GH）和营养物的摄入对胰岛素样生长因子-Ⅰ的合成起刺激作用。血清IGF-Ⅰ的浓度和血清生长激素水平在24小时内大致平行。因此，血清IGF-Ⅰ测定值可更好地反映个体GH分泌状态。另外，IGF-Ⅰ也是巨人症和肢端肥大症治疗是否有效的重要指标之一^[10-12]。为规范胰岛素样生长因子-Ⅰ定量分析，促进各实验室间测值具有可比较性，本实验室开展了人重组胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）第1次免疫测定用国家标准品的研制。

1 材料和方法 1.1 仪器和试剂 1.1.1 仪器

Hamilton-MICROLAB ^®540B配液仪，瑞士Hamilton公司生产，分装用；全自动化学发光检测仪，型号：AutoLumo A2000，由郑州安图生物工程股份有限公司提供；全自动化学发光测定仪，型号：Maglumi 2000 Plus，由深圳市新产业生物医学工程股份有限公司提供；化学发光免疫分析仪，型号：IMMULITE 2000XPi，由西门子医学诊断产品（上海）有限公司提供。

1.1.2 试剂盒

本次协作标定选择了3家IGF-Ⅰ定量标记免疫分析系统，包含国产与进口试剂盒，检测原理均为夹心法标记免疫分析。

胰岛素样生长因子-Ⅰ定量检测试剂盒（磁微粒化学发光法）：郑州安图生物工程股份有限公司生产，线性范围为15~1000 ng·mL^-1；胰岛素样生长因子-Ⅰ测定试剂盒（化学发光法）：深圳新产业生物医学工程股份有限公司，线性范围为50~1000 ng·mL^-1；IMMULITE 2000胰岛素样生长因子-Ⅰ测定试剂盒（化学发光法）：西门子有限公司，线性范围为15~1000 ng·mL^-1。

1.1.3 IGF-Ⅰ国际标准品

NIBSC批号：02/254，冻干品，8.5 µg·支^-1，由中国食品药品检定研究院提供。

1.2 方法 1.2.1 候选品制备

根据目前市场多家IGF-Ⅰ测定试剂盒校准品浓度，按7000 ng·支^-1水平制备候选品。取IGF-Ⅰ原料（BBI公司），采用以下缓冲体系：0.01 M PBS溶液（pH=7.2~7.4）、10%甘露醇（w/v）、5%海藻糖（w/v）、1%叔丁醇（v/v）、0.5% BSA（w/ v）、0.1% EDTA-2K（w/v），进行配制，最终得到理论浓度为7857 ng·mL^-1的IGF-Ⅰ标准品溶液。按每支安瓿0.5 mL分装后冻干，即为IGF-Ⅰ国家标准品候选品。

1.2.2 瓶间精密度分析

按中华人民共和国国家一级标准物质技术规范（JJG 1006-94）相关要求，随机抽取15支候选品，在安图生物公司试剂盒上，平行进行分析测定。此15支候选品数据同时作为标定数据。候选品检测采用同一批号试剂盒、同一台测试仪器、同一天内完成测试。

1.2.3 稳定性分析

每次随机选取2支候选品于37℃放置1、2、4、6、8、10、12W后，在安图生物公司试剂盒上，以-20℃保存的IGF-Ⅰ国家标准品候选品（记为0周）为对照，对稳定性候选品样本平行进行分析测定。候选品采用不同时间点放入，最终时间点取出，统一检测；采用同一批号试剂盒、同一台测试仪器、同一天内完成测试。

1.2.4 协作标定

在各厂家试剂线性范围内，以IGF-Ⅰ国际标准品为对照，对候选品进行协作标定。按各试剂说明书进行试验，采用Log-Log双对数的数学模型进行数据处理分析，并对每一次独立分析中的国际标准品曲线和候选品曲线的斜率进行t检验。根据量反应平行线原理，对各厂家试剂盒的标定结果进行统计分析和汇总。

2 结果 2.1 IGF-Ⅰ候选品的瓶间精密度结果

IGF-Ⅰ候选品的瓶间精密度为1.9%，数据详见表 1，该数据同时为安图的标定结果。

2.2 稳定性试验结果

候选品在37℃放置1、2、4、6、8、10、12 W后，与-20℃保存的候选品（作为0周）的效价比在0.98~1.02之间，即效价基本无变化，表明候选品非常稳定，详见表 2。

2.3 候选品的协作标定

以IGF-Ⅰ第1次国际标准品为对照品，在各检测系统上测定候选品，两条剂量-反应曲线均不显著偏离平行（t检验），表明候选品与IGF-Ⅰ国际标准品同质，根据标定结果（详见表 1、表 3和表 4），每支候选品效价均值为7446 ng·支^-1，这与理论效价（7857 ng·支^-1）仅有5%左右的损失，表明该候选品冻干前后的状态稳定。最终确定效价为7400 ng·支^-1。

3 讨论

IGF-Ⅰ是细胞生长和分化的主要调节因子之一。多种因素如年龄、性别、营养状态和生长激素的释放等都影响血清IGF-Ⅰ浓度。尽管肢端肥大症的临床特征和血清IGF-Ⅰ浓度并非紧密相关，但测定血清IGF-Ⅰ在诊断GH不足和肢端肥大症仍是有用的。营养状态影响IGF-Ⅰ浓度，它是循环和组织IGFs系统的重要调节因子。在其他状态，如严重创伤和败血症时有GH抵抗，血清IGF-Ⅰ浓度也降低。糖尿病状态下GH/ IGF-Ⅰ轴异常，GH增高、IGF-Ⅰ减低。此外IGF-Ⅰ是调节骨细胞功能和代谢的重要因子，并可能介导甲状旁腺激素的作用。并且有报道称，胰岛素样生长因子与肿瘤的发生、发展及转移关系密切，近年来引起了国内外广泛的关注。IGF-Ⅰ和胰岛素对癌症的发生、发展的作用，已在一些动物和人体的研究中被证实。IGF和胰岛素可能是癌症的重要危险因素，同时也可以作为癌症治疗的新分子靶点^[13-15]。

人重组胰岛素样生长因子-Ⅰ第1次免疫测定用国际标准品（NIBSC批号：02/254）建立于2008年，主要用于全世界范围内免疫测定人血清和血浆中IGF-Ⅰ方法的校准，是各种IGF-Ⅰ免疫分析试剂盒校准品溯源时使用的上一级标准品。但我国暂无该标准品，因此制备IGF-Ⅰ国家标准品有助于IGF-Ⅰ量值传递，促进各实验室间同项目数据具有可比较性，具有重要的市场价值。

目前我国上市销售且均有注册证的国产或进口IGF-Ⅰ定量免疫分析试剂盒并不多，仅5家，且主要为化学发光法试剂。本次协作标定选择的3家试剂为我国市场流通的主要产品，包括国产和进口，因此试验结果具有一定的代表性。本实验室以现行IGF-Ⅰ国际标准品为对照品，对每组试验中IGF-Ⅰ国际标准品与IGF-Ⅰ国家候选品的标准曲线斜率进行显著性检验（t检验），所有试验证实二者均平行，表明候选品与国际标准品同质。经标定，IGF-Ⅰ候选品效价均值为7446 ng·支^-1，为方便试验操作及标准品的稀释，最终确定本候选品IGF-Ⅰ效价为7400 ng·支^-1。通过瓶间精密度、热稳定性检测，此批IGF-Ⅰ候选品满足作为国家标准品的要求，可用于IGF-Ⅰ免疫分析及相应试剂盒的性能评价，并规范IGF-Ⅰ定量免疫的测定。