长春瑞滨是半合成的长春花生物碱，具有广谱抗肿瘤活性，属于细胞周期特异性抗癌药，由法国皮尔法伯制药公司(Pierre Fabre)研发。酒石酸长春瑞滨阻断染色体在有丝分裂过程中的分离，临床主要用于治疗非小细胞肺癌、转移性乳腺癌等^[1-2]。酒石酸长春瑞滨原料药标准已收载入EP、USP和《中国药典》中。

酒石酸长春瑞滨为白色或类白色粉末或结晶性粉末；无臭^[3]。酒石酸长春瑞滨的合成中要用到催化剂四氟硼银（AgBF4）^[4]，其含量在现行版欧洲药典标准中通过测定硼、氟、银元素作为杂质控制，其中银限度为5 μg·mL^-1[5]。EP标准中采用原子吸收火焰法测定杂质银^[6]，《中国药典》未控制催化剂的残留；同时，两个标准均未对有害元素进行控制。2018年USP要求对进口原料药中的铅、镉、砷、汞等多种有害元素采用ICP-MS方法进行检测^[7]。与原子吸收法相比，ICP-MS具有准确稳定、检出限低、基体干扰少、多元素同时测定等优点^[8]，在化学药品及中药的重金属检测中有很多应用^[9-14]，采用在线内标测定，更可有效消除ICP-MS的仪器漂移、抑制基体干扰。为更好地保证药品安全性，本研究结合USP要求采用ICP-MS技术，探索建立快速测定酒石酸长春瑞滨中催化剂银残留和多种有害元素的测定方法。

1 试验部分 1.1 仪器与试药 1.1.1 仪器

Agilent 7700X电感耦合等离子体质谱仪(Agilent科技)；XS205电子天平(梅特勒托利多公司)；Milli-Q-Reference超纯水机(密理博公司)。

1.1.2 试剂

硝酸（Merck，AR）；水为超纯水。

1.1.3 标准物质

钒、铬、钴、镍、铜、砷、钼、镉、钡、铅混合元素标准溶液（1000 μg·mL^-1，o2si公司，批号：10071238-1）；锡、锑混合元素标准溶液（1000 μg·mL^-1，o2si公司，批号：10071238-3）；汞单元素标准溶液（1000 μg· mL^-1，o2si公司，批号：143369-9）；银单元素标准溶液（1000 μg·mL^-1，Aladdin，批号：S117587-G1224055）；钪单元素标准溶液（1000 μg·mL^-1，GSB 04-1750-2004）；锗单元素标准溶液（1000 μg·mL^-1，GSB 04-1728-2004）；铟单元素溶液标准物质[100 μg·mL^-1，GBW（E）080271-10071]；铋单元素溶液标准物质[100 μg· mL^-1，GBW（E）080271-12011]。

1.1.4 供试品

酒石酸长春瑞滨原料药由绍兴民生医药有限公司提供（批号：VBT01507001-S-G、VBT01507001-S-Y、VBT01507002-S-G、VBT01507002-S-Y、VBT01507003-S-G、VBT01507003-S-Y）。

1.2 试验方法 1.2.1 仪器工作条件

镍锥，在He模式下调谐，经优化的工作参数：功率1550 W；采样深度8.0 mm；雾化室温度2 ℃；载气流速1.03 L·min^-1；进样速度0.10 r·s^-1；氧化物比值0.450%；双电荷比值0.825%。

1.2.2 溶液的制备 1.2.2.1 内标溶液的制备

各精密量取钪、锗、铟、铋内标元素溶液0.1 mL，置100 mL量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，即得。各元素浓度为钪1 μg·mL^-1、锗1 μg·mL^-1、铟0.1 μg·mL^-1、铋0.1 μg·mL^-1。在仪器测定时通过蠕动泵在线加入内标溶液。

1.2.2.2 标准溶液的制备

取银单元素标准溶液（1000 μg·mL^-1）0.10 mL，置100 mL量瓶中，用5%硝酸稀释至刻度，摇匀作为储备液（1000 ng·mL^-1），同法制得汞元素储备液（100 ng·mL^-1），钒、铬、钴、镍、铜、砷、钼、镉、锡、锑、钡、铅12个元素储备液（100 ng·mL^-1）。取银元素储备液用5%硝酸稀释成0、1、5、20、50、100 ng·mL^-1系列浓度的标准溶液。精密吸取汞元素标准溶液用5%硝酸稀释成0.0、1.0、3.0、4.0、5.0、10.0 ng·mL^-1系列浓度的溶液。精密吸取混合元素标准溶液用5%硝酸稀释成含钒、铬、钴、镍、铜、砷、钼、镉、锡、锑、钡、铅12个元素浓度均为0.0、1.0、2.0、4.0、10.0、20.0 ng·mL^-1的系列溶液。

1.2.2.3 供试品溶液的制备

称取样品约0.25 g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5 mL，混匀，80℃电热板上预消解30 min，放冷，盖上内盖，旋紧外套，置微波消解仪内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓644中国药事2018年5月第32卷第5期CHINESE PHARMACEUTICAL AFFAIRS zhgysh加热至红棕色蒸气挥尽，用超纯水转移置25 mL量瓶中，并用超纯水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。同法制备样品空白溶液（100 mg·mL^-1）。

1.3 方法学考察及试验结果 1.3.1 线性关系考察

以超纯水为空白背景，在优化的试验条件下，依次测定各个浓度的标准溶液，以测定元素的计数值与其对应内标元素的计数值之比为纵坐标（Y），相应浓度（ng·mL^-1）为横坐标（X），绘制标准曲线，各元素线性方程、相关系数、线性范围见表 1，结果表明各元素的标准曲线线性关系良好，相关系数在0.9988以上。

1.3.2 方法检出限与定量限

在最佳试验条件下，连续测定10份试剂空白溶液，计算标准偏差，以连续测定空白样品溶液响应值的3倍标准偏差（3SD）所对应的银元素浓度作为检测限^[6]。试验结果：银、钒、铬、钴、镍、铜、砷、钼、镉、锡、锑、钡、铅、汞检出限分别为0.003、0.020、0.141、0.069、0.077、0.362、0.031、0.057、0.022、0.078、0.017、0.724、0.095、0.005 ng·mL^-1。

1.3.3 重复性试验

取批号为VBT01507001-S-G的样品6份，分别按“1.2.2.3”节方法制备供试品溶液，按“1.2.1”节仪器工作条件进行测定，计算元素含量。结果各元素RSD在2.5%~15.0%，表明重复性结果能满足痕量测试要求。

1.3.4 加样回收率试验

取同一批号VBT01507001-S-G样品，共9份，每份约0.25 g，精密称定，置容量瓶中，加入“1.2.2.2”中的标准储备液，加入量以最终样品浓度为标准系列的中间浓度为100%，同时加入50%、150% 2个水平的标准储备液，按供试品溶液制备步骤进行消解处理，并最终定容置25 mL样品管中，测定样品溶液，计算加样回收率及RSD，结果见表 2，表明各元素的回收率均在86%~110%，符合痕量分析要求。

1.3.5 样品测定

取“ 1. 1. 4 ”节6批供试品，分别按“1.2.2.3”节方法制备供试品溶液，按“1.2.1”节仪器工作条件进行测定。结果表明银残留量比较稳定，在0.23~0.25 mg·kg^-1，而其他有害元素是由于污染产生的，含量较低，其中钒在0.004~0.005 m g · k g^-1，铬在0. 0 7 ~ 0. 1 9 m g · k g^-1，钴在0.001~0.06 mg·kg^-1，镍在0.07~0.10 mg·kg^-1，铜在0.01~0.50 mg·kg -1，砷在0.0005~0.001 mg·kg -1，钼在0.0006~0.007 mg·kg -1，镉在0.0001~0.0004 mg·kg -1，锡在0.0005~0.003 mg·kg^-1，锑在0.0000~0.0008 mg·kg^-1，钡在0.00~0.09 mg·kg^-1，铅在0.002~0.08 mg·kg^-1，汞在0.0002~0.0006 mg·kg^-1。

2 测量不确定度的评定

通过计算方法的不确定度，可以较系统地分析方法中影响结果的主要因素^[15]。根据《测量不确定度评定与表示》，不确定度分为A类、B类。A类不确定度是样品本身的不均匀性引起的不确定度，其公式为（SD表示n次测量结果的标准偏差，n表示测量次数，y表示平均值）。B类不确定度在本试验中是由质量、体积和浓度这三大因素引起^[16-17]，样品称量时，万分之一天平的允许误差会导致质量的相对标准不确定度；样品稀释定容时，容量瓶的允许误差、温度的变化、容量瓶读数误差会导致体积的相对标准不确定度；样品中银含量测定时，配制系列标准溶液、采用最小二乘法作出拟合曲线求得样品浓度均会导致浓度的相对标准不确定度。其不确定度以下面公式表示：

其中表示B类不确定度；表示天平产生的不确定度；表示容量瓶产生的不确定度；表示测量得到的浓度的不确定度。最后由A类不确定度和B类不确定度可以合成标准不确定度，然后进行扩展不确定度评定。

以银残留量为例计算不确定度，其中A类不确定度为同一批号（VBT01507001-S-G）6份样品银含量的结果得到，计算结果为0.0103 ng·mL^-1；B类不确定度由以下因素产生，包括万分之一天平（计算结果为3.3×10^-4 ng·mL^-1）、25 mL容量瓶（计算结果为1.0×10^-3 ng·mL^-1）、测量得到的浓度（包括配制标准曲线的容器产生的不确定度，计算为0.0147 ng·mL^-1，标准曲线拟合产生的不确定度，计算为0.025 ng·mL^-1），从计算结果看产生不确定度的主要因素是样品的均一性和标准曲线的线性拟合程度（r²），因此，在试验中要注意样品混合均匀，标准曲线的线性拟合越高越好。

3 讨论

相对于火焰原子吸收法（FAAS）、石墨炉原子吸收法(GFAAS)和原子荧光法(AFS)，ICP-MS具有极低的检出限，此方法更加准确可靠、灵敏便捷，可用于酒石酸长春瑞滨中银残留级多种有害元素的测定，能有效控制酒石酸长春瑞滨的质量安全。本试验选择铟、锗、钪、铋作为内标元素，并通过蠕动泵在线加入内标溶液，可改善质谱分析时存在的基体效应，一定程度上校正仪器漂移误差，抑制基体干扰效应，提高准确率。由测量不确定度评定可知采用电感耦合等离子质谱法测定酒石酸长春瑞滨中各元素含量时，其测量不确定度主要来源于采用标准浓度系列拟合的曲线求得的样品溶液浓度，而样品称量和溶液定容引入的不确定度影响很小。由元素浓度导致的2个分量中，主要是拟合曲线影响最大，因此，电感耦合等离子质谱仪的稳定性是测量准确与否的关键所在。