益气活血风静胶囊是根据益气活血法中医理论，分别提取人参和牡丹皮中具有抗脑缺血活性的人参总皂苷、丹皮酚和牡丹皮总苷，混合制备而成的中药五类新药^[1]。采用益气活血法治疗缺血性中风已日趋广泛^[2]；人参皂苷Re能够起到保护再灌注损伤的作用，丹皮酚具有抗炎、抗心肌细胞及脑细胞缺血缺氧损伤及缺血再灌注损伤等作用；将人参总皂苷、丹皮酚和牡丹皮总苷等配伍合用比单一使用具有更好的抗脑缺血活性^[3]。本实验观察益气活血风静胶囊体内抗血小板聚集的作用及其对凝血四项的影响，对其作用机制进行初步探讨，为益气活血风静胶囊临床用药提供理论和实验依据。

1 材料 1.1 动物

SD大鼠，SPF级，体重170~190 g；家兔，普通级，体重1.8~2.2 kg，购自河南省实验动物中心，许可证号：SCXK（豫）2010-0002。

1.2 药品与试剂

益气活血风静胶囊的药粉，批号：101022，含量：每克药粉含4.2 g生药，棕黄色至棕褐色粉末，有效期两年，通风、阴凉、干燥保存，河南中医学院一附院制剂室制备。临用前以纯化水分别配制成含生药0.67、0.34和0.17 g·mL^-1的混悬液。拟临床人用剂量为0.3024g（生药）/（kg·d），人以60 kg计，为临床拟用等效剂量的2.2、1.1、0.6倍。大鼠等效剂量为1.45 g（生药）/（kg·d），家兔等效剂量为0.74 g（生药）/（kg·d）。人参有效部位：白色粉末，有效期两年，通风、阴凉、干燥保存，河南中医学院一附院制剂室制备，临用前以纯化水分别配制成30 mg·mL^-1的混悬液。牡丹皮有效部位：白色粉末，有效期两年，通风、阴凉、干燥保存，河南中医学院一附院制剂室制备。临用前以纯化水分别配制成70 mg·mL^-1的混悬液。脑心通胶囊，陕西步长制药有限公司生产，批号：160346，规格：0.4g/粒。尼莫地平片，天津市中央药业有限公司，批号：20160419，规格：20 mg/片。乌拉坦（氨基甲酸乙酯），上海化学试剂公司分装厂生产，批号：F20110116。凝血酶原时间（PT）测定试剂盒，上海长岛生物技术有限公司生产，批号：1110121。活化部分凝血活酶时间（APTT）测定试剂盒，上海长岛生物技术有限公司生产，批号：Y215011。凝血酶时间（TT）测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司生产，批号：Y22085。纤维蛋白原含量（FIB）测定试剂盒，上海太阳生物技术有限公司生产，批号：Y230067。

1.3 仪器

CP225D型电子天平，德国Sartorius公司；PB4002-S型电子天平，瑞士METTLER TOLEDO仪器有限公司；RTZ-10A-RT型婴儿秤，无锡市衡器厂；TDL-5M型冷冻离心机，湘仪离心机仪器有限公司；LBY-NJ4型血小板聚集测定仪，北京普利生仪器有限公司。

2 方法 2.1 分组和给药 2.1.1 大鼠随机分组及给药

取大鼠50只，体重170~190 g，随机分为5组，每组10只，雌、雄各半。①空白对照组，给予纯化水；②阳性对照药组，给予脑心通胶囊1 g·kg^-1，为临床等效剂量的2.6倍；③益气活血风静胶囊高剂量组0.67 g·mL^-1，④益气活血风静胶囊中剂量组0.34 g·mL^-1；⑤益气活血风静胶囊低剂量组0.17 g·mL^-1，分别相当于大鼠等效剂量的4.6、2.3和1.2倍。灌胃给药，每天1次，连续14 d，给药容积均为10 mL·kg^-1体重。

2.1.2 家兔随机分组及给药

取家兔30只，体重1.8~2.2 kg，随机分为5组，每组6只，雌、雄各半。①空白对照组，给予纯化水；②阳性对照药组，给予脑心通胶囊0.5 g·kg^-1，为临床等效剂量的2.6倍；③高剂量组，给予益气活血风静胶囊3.36 g·kg^-1，④中剂量组，给予益气活血风静胶囊1.68 g·kg^-1；⑤低剂量组，给予益气活血风静胶囊0.84 g·kg^-1。分别相当于家兔等效剂量的4.6、2.3和1.1倍。灌胃给药，每天1次，连续10 d，给药容积均为5.0 mL·kg^-1体重。

2.1.3 大鼠大脑中动脉阻塞造模及是试验治疗

取SD大鼠72只，体重170~190 g，雌、雄各半。大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）大鼠造模^[4-6]：将动物用氯胺酮腹腔注射麻醉，置左侧卧位，沿耳眼连线中点切开皮肤，分离颞肌，咬断颧弓，在颧弓根前方用牙科钻钻孔，手术显微镜下撕开硬脑膜，暴露大脑中动脉（MCA），在大脑下静脉和嗅束间结扎，血流中断后于远侧切断，假手术组大鼠用针线穿过大脑中动脉，不结扎和不切断血管。分层缝合肌肉和皮肤。手术后，将模型成功动物随机分组：①假手术对照组，给予生理盐水；② MCAO模型组，给予生理盐水；③尼莫地平阳性对照药组，给予30 mg·kg^-1，为临床等效剂量7.5倍；④益气活血风静组，给予1 g·kg^-1，为临床等效剂量3.3倍；⑤人参有效部位组，给予0.3 g·kg^-1，为临床等效剂量3.3倍；⑥牡丹皮有效部位组，给予0.7 g·kg^-1，为临床等效剂量3.3倍，每组10只，术后立即灌胃给药，每天一次，连续5 d。给药容积为1 0 mL·kg^-1体重。

2.2 指标的测定 2.2.1 血小板聚集率测定^[7]

大鼠及家兔腹主动脉取血，置柠檬酸钠9:1抗凝处理的一次性使用人体静脉血样采集容器（血凝测定用）中，600 r·min^-1，离心10 min，小心吸取上层富含血小板血浆（PRP），将已吸取出PRP的血再次以3000 r·min^-1离心10 min，小心吸取上层贫血小板血浆，在另一方杯中加入300μLPPP备用；取5μL 3000μmol·L^-1浓度的ADP作为血小板聚集诱导剂，用血小板聚集测定仪测定血小板聚集率。

血小板聚集抑制率=（对照组血小板最大聚集率-给药组血小板最大聚集率）/对照组血小板最大聚集率×100%。

2.2.2 凝血四项的测定^[8-10]

大鼠及家兔腹主动脉取血，置柠檬酸钠9:1抗凝的一次性使用人体静脉血样采集容器（血凝测定用）中，3000 r·min^-1，离心10 min，取血浆，用血凝仪测定PT、APTT、TT和FIB。

2.2.3 脑组织含水量测定

断头取脑，取右侧大脑半球，称湿重后，置于80℃烤箱中烤至恒重，称干重，计算脑组织含水量。

2.3 统计学方法

用SPSS 16.0软件进行统计学分析，结果以均数±标准差（x±s）表示，先做ANOVA分析，然后进行t检验或q’检验（Dunnett't法），以P＜0.05为差别有显著性差异，给药组间比较用q检验（SNK法），以P＜0.05为差别有显著性差异。

3 结果 3.1 益气活血风静胶囊对大鼠血小板聚集的影响

由表 1试验结果可见，脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊3个剂量组均能使大鼠血小板聚集率降低，与空白对照组比较，脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊高、中剂量组有显著性差异（P＜0.05）。表明益气活血风静胶囊具有改善血小板聚集功能的作用。

3.2 益气活血风静胶囊对家兔血小板聚集的影响

由表 2试验结果可见，脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊3个剂量组均能使家兔血小板聚集率降低，与空白对照组比较具有显著性差异或非常显著性差异（P＜0.05或＜0.01）。表明益气活血风静胶囊具有改善血小板聚集功能的作用。

3.3 益气活血风静胶囊对大鼠凝血四项的影响

由表 3试验结果可见，脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊3个剂量组均能延长大鼠血浆PT、APTT、TT，与空白对照组比较，具有显著性差异（P＜0.05）；脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊高剂量组能降低大鼠血浆FIB含量，与空白对照组比较，有非常显著性差异（P＜0.01），益气活血风静胶囊中剂量组差别有显著性差异（P＜0.05）。表明益气活血风静胶囊具有抗凝血作用及显著提高大鼠血浆纤维蛋白溶解酶活性的作用。

2.4 益气活血风静胶囊对家兔凝血四项的影响

由表 4试验结果可见，脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊高、中剂量组均能延长家兔血浆PT、APTT、TT，与空白对照组比较有显著性差异或非常显著性差异（P＜0.05或＜0.01）；益气活血风静胶囊低剂量组均能延长家兔血浆PT、APTT，与空白对照组比较有显著性差异或非常显著性差异（P＜0.05或＜0.01）；脑心通胶囊阳性对照组和益气活血风静胶囊3个剂量组均能明显降低FIB含量，与空白对照组比较有非常显著性差异（P＜0.01）。表明益气活血风静胶囊具有抗凝血作用及显著提高家兔血浆纤维蛋白溶解酶活性的作用。

2.5 益气活血风静胶囊对MCAO大鼠造模后血液流变学的影响

与假手术组比较，模型组大鼠PT、APTT、TT明显缩短（P＜0.05），FIB含量升高（P＜0.05）；尼莫地平组、益气活血风静胶囊组及人参有效部位组大鼠TT明显缩短（P＜0.01）；牡丹皮有效成分组大鼠PT、APTT、TT明显缩短（P＜0.01）。

与模型组比较，尼莫地平组、益气活血风静胶囊组与人参有效部位组大鼠PT、APTT、TT明显延长（P＜0.01或P＜0.05），FIB含量明显降低（P＜0.01）；牡丹皮有效部位组大鼠TT延长（P＜0.05），FIB含量明显降低（P＜0.01）。见表 5。

对局灶性脑缺血大鼠脑含水量的影响：模型组大鼠脑组织含水量明显增加，与假手术组比较有非常显著性差异（P＜0.01）；尼莫地平组、益气活血风静组、人参有效部位组与牡丹皮有效部位组能显著降低模型大鼠脑组织含水量，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05）。见表 6。

3 结论

益气活血风静胶囊处方为人参总皂苷、丹皮酚β-环糊精包合物、牡丹皮总苷。人参皂苷Rd注射液对急性缺血性脑卒中良好的临床疗效^[11]。人参皂苷Re能够起到保护再灌注损伤的作用^[12]；人参－牡丹皮功效成分组具有抗脑水肿、缩小梗死面积、抗血栓和改善血流变等抗脑缺血活性，其作用强度优于人参总皂苷丹皮酚和牡丹皮总苷单独使用^[13]。血栓是血管内皮损伤，抗凝、凝血、纤溶系统、血小板黏附、聚集和释放反应以及凝血活性增高等多种因素综合作用下形成的^[14]。APTT和PT分别是代表内源性和外源性凝血途径的指标，TT及Fib含量则反映纤维蛋白原溶解的活性，具有抗凝血作用。

益气活血风静胶囊由人参有效部位（人参皂苷提取物）和牡丹皮有效部位（牡丹皮总苷提取物和丹皮酚包合物）组成人参大补元气，复脉固脱，牡丹皮活血化瘀，清热凉血，二者配伍，符合中医理论，标本兼治，通补结合，具有益气通络，活血化瘀的作用另外，益气活血风静胶囊中主要活性成分相对清楚，生物活性较好，体现出了中医药治疗缺血性中风的特色和优势。

试验结果表明益气活血风静胶囊对大鼠和家兔具有较好的抗凝血作用，能显著抑制血小板聚集，其中高剂量最佳；益气活血风静胶囊及丹皮活性成分组同时对MCAO大鼠有较好的活血作用，为益气活血风静胶囊临床应用提供了药理学依据。本实验对益气活血风静胶囊及人参皂苷提取物、丹皮酚提取物的抗血栓作用进行了初步的探索，为了获得最佳临床药效，益气活血风静胶囊中人参皂苷及牡丹皮最佳配伍比例尚需通过药理学实验筛选，益气活血风静胶囊与人参皂苷提取物及丹皮酚提取物的抗血栓药效有待进一步进行药效比较，各有效成分产生药效的作用机制仍有待进一步深入。根据益气活血法中医理论，将人参有效部位（人参总皂苷）和牡丹皮有效部位（丹皮酚包合物和牡丹皮总苷）配伍合用，合用后表现出较好的抗脑缺血活性，其作用强度优于有效部位单独使用。开展人参牡丹皮有效部位群治疗缺血性中风的新药开发研究，将具有较好的市场前景和研究价值。