人参是我国传统中医药中一味非常名贵的药材，历来被视为百药之王，而随着中药国际化的日益发展，越来越多的西方国家也认识到了人参的药用和保健价值。而农药残留是人参最重要的安全问题。目前，人参中的农药残留研究主要集中于有机磷和有机氯等常见或已被禁用的农药品种，而一些新型农药的研究较少。

氟啶胺是由日本石原产业公司开发的新型取代苯胺类的广谱杀菌剂，其化学结构式见表 1。纯品为黄色结晶粉末，密度为1.757g·mL^-1（20 ℃），熔点为115~117 ℃。不溶于水，溶于甲醇、丙酮等有机试剂。对热、酸、碱稳定，在光照下易分解。氟啶胺对灰葡萄孢引起的多种灰霉病有特效。同苯并咪唑类、二羧酰亚胺类，及目前市场上已有的杀菌剂无交互抗性。对交链孢属、疫霉属、单轴霉属、核盘菌属和黑星菌属等病菌引起的病害亦有良好的活性^[1-4]。

本试验采用固相萃取小柱净化，液质法检测人参茎叶、人参根及土壤中氟啶胺的残留，并将该方法用于实际样品的检测。研究证明该方法受人参中复杂基质干扰较小，能满足人参中氟啶胺农药残留的检测要求，为研究氟啶胺在人参种植过程中的残留消解奠定了基础。

1 仪器与试药 1.1 仪器

API4000三重四极杆液质联用仪（美国AB公司）; KQ700E型超声波清洗器（江苏昆山超声仪器公司）; Milli-Q Gradient（美国密理博公司）; IKAT18型组织捣碎机；DS-1型固相萃取柱：ThermoFlosiril（1000 mg，6 mL）; BT-15D 0.1 mg分析天平(美国赛多利斯公司)。

1.2 试药

乙腈（色谱级，Fisher试剂公司）、丙酮（农残级，天津科密欧试剂有限公司）、正己烷（农残级，天津科密欧试剂有限公司）、氯化钠（分析纯，国药集团试剂有限公司）、无水硫酸镁（分析纯，国药集团试剂有限公司）、乙酸铵（国药集团试剂有限公司），氟啶胺标准品（Dr.Ehrenstorfer，批号：C13671500），水为超纯水。

2 方法与结果 2.1 样品的制备与保存

喷洒氟啶胺前，取人参茎叶、人参根及土壤空白样品，氟啶胺的喷洒选取推荐使用剂量262.5g.a.i/ha，于喷药后的第7天，取人参茎叶、人参根及土壤样品，做好标记，迅速密封，于－20 ℃保存。

2.2 氟啶胺的含量测定方法 2.2.1 液相色谱柱及流动相

Waters BEH C18色谱柱（2.1 mm×150 mm，1.7 μm）；以乙腈-5 mM乙酸铵（65︰35）为流动相，梯度洗脱程序见表 1；流速：0.3 mL·min^-1；柱温：35 ℃；进样量：5μL。

2.2.2 质谱条件

ESI负离子模式、喷雾电压－ 4000 V、离子传输毛细管温度300 ℃、采用MRM扫描模式。见表 2。

2.2.3 线性关系考察

取氟啶胺对照品10 mg，精密称定，置100 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，即得每1 mL含氟啶胺100μg的溶液，作为标准储备液。该储备液在0 ~ 4 ℃避光保存。精密量取标准工作储备液，采用系列稀释法配制成1.5、7.5、15、40、80、200、400 ng·mL^-1的标准工作溶液。按照上述色谱及质谱条件进行试验，对定量离子对进行扫描，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，制作标准曲线，得回归方程：

$Y=20765X+10818\ \ \ r=1.0000$

结果证明氟啶胺浓度在0.0015 ~ 0.4μg·mL^-1线性关系良好。对照品色谱图见图 1。

2.2.4 样品处理

参考相关文献^[5-10]，建立样品处理方法。分别取剪碎的人参茎叶及人参根样品置于匀浆仪中匀浆，取土壤样品及匀浆后的人参茎叶和人参根样品各4.5 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入水15 mL，混匀，放置2 h，精密加入乙腈15 mL，剧烈振摇提取1 min，再加入预先称好的无水硫酸镁4 g与氯化钠l g的混合粉末，再次剧烈振摇1 min后，离心（4000转·min^-1）1 min。精密吸取上清液10 mL，40 ℃蒸干，加正己烷l mL使溶解，转移置弗罗里硅土固相萃取小柱[1000 mg/6 mL，用正己烷-丙酮（20 ︰ 80）混合溶液10 mL和正己烷10 mL预洗]上，残渣用正己烷洗涤3次，每次l mL，洗液转移置同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮（20 ︰80）混合溶液10 mL洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加甲醇定容至5 mL，即得。按照上述色谱及质谱条件进行试验，供试品色谱图见图 2。分别取空白土壤、人参茎叶和人参根样品各4.5 g，同法制备空白样品，进样测定，空白样品色谱图见图 3。

2.2.5 精密度试验

取同一供试品溶液，按上述液质联用条件，连续进样测定6次，氟啶胺峰面积积分值的RSD为2.0%，表明仪器进样精密度良好。

2.2.6 重复性试验

取人参样品，依“2.2.4”样品处理方法提取6份供试品溶液，按上述液质联用条件测定，结果氟啶胺含量X = 3.1μg·kg^-1，RSD为7.4%。

2.2.7 回收率试验

我国目前尚未制定氟啶胺在人参中的最大允许残留限量（MRL）。欧盟规定氟啶胺在人参中的最大残留量为3 mg·kg^-1[11-12]。参照氟啶胺在人参中的最大残留限量（MRL），根据防效及残留量结果，设定3个加标浓度为0.05、0.5、1 mg·kg^-1。取空白土壤、人参茎叶及人参根样品各4.5 g，分别添加氟啶胺0.05、0.5、1 mg·kg^-1 3个水平，重复5次，按照上述前处理方法和仪器条件测定，结果见表 3。

2.2.8 检出限

精密量取氟啶胺对照品溶液（3.9321 ng·mL^-1）0.3 mL，加入具塞聚乙烯离心管中，挥干，取不含氟啶胺的人参样品4.5 g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，其余按“2.2.4”样品处理方法制备。当样品浓度为1.1 μg·kg^-1时，色谱图中氟啶胺色谱峰基本为3倍的基线噪音，由此确定该方法检出限为1.1 μg·kg^-1。

3 结果与讨论 3.1 供试品制备方法考察

氟罗里硅土柱洗脱溶剂系统的考察：分别以正己烷-二氯甲烷、正己烷-丙酮系统作为洗脱溶剂，洗脱人参样品中的氟啶胺，结果正己烷-丙酮系统优于正己烷-二氯甲烷系统，因此，选择正己烷-丙酮作为洗脱溶剂系统^[2-3]。

氟罗里硅土柱洗脱溶剂比例的考察：采用正己烷-丙酮（80︰20）、正己烷-丙酮（50︰50）、正己烷-丙酮（20︰80）作为样品洗脱溶剂，结果正己烷-丙酮（20︰80）作为洗脱溶剂明显优于正己烷-丙酮（80︰20）、正己烷-丙酮（50︰50），因此，选择正己烷-丙酮（20︰80）作为洗脱溶剂。

洗脱溶剂量的考察：采用正己烷-丙酮（20︰80）为洗脱溶剂，分别考察洗脱量为10、20、30mL时的洗脱情况，结果三者无显著性差异，因此，选择洗脱体积为10 mL。

3.2 对照品溶液的配制方法考察

在痕量分析中，通常采用空白基质加标制备校准曲线，以消除常见的基质效应。在试验中，考察了氟啶胺采用空白基质配制对照液与采用纯溶剂配制对照液，结果无差异，考虑到试验操作的便捷性，最终决定采用纯溶剂配制对照品溶液。

3.3 液质联用仪分析条件的确定

质谱条件的优化：根据氟啶胺分子的结构，选择ESI（－）作为电离化模式，将氟啶胺标准品配制成1~2 μg·mL^-1的甲醇溶液，通过全扫描模式找出母离子。使用二级扫描的方式，根据母离子选择特征离子，选用离子强度较大的2个子离子作为定量和辅助定性离子，并优化其碰撞能量及去簇电压，最后在MRM方式中进一步确定离子碰撞能量（CE）、去簇电压（DP）。

3.4 质量分析评价

本方法可以快速、简便地测定氟啶胺在人参种植过程中的残留量，方法技术先进，回收率良好、灵敏度高、精密度好^[13-15]，对于基质复杂的人参样品，利用选择离子对同时定性和定量测定人参中氟啶胺的残留量，大大提高了方法的选择性，可以满足国内外检测限量的要求和国际通用的质量控制要求。