柴胡注射液是柴胡经蒸馏制成的灭菌水溶液，用于疏解退热、治疗感冒、流感等上呼吸道感染的病证。主要有解热、抗炎、增强免疫机能等作用。本文依据《中国药典》2010年版（二部）附录Ⅺ E细菌内毒素检查法^[1]，并参考文献^[2-3]，对柴胡注射液的细菌内毒素检查法进行了研究。

1 材料 1.1 试药

柴胡注射液（规格：2 mL，开开援生制药股份有限公司提供，批号：1501291，1507081，1509241）；细菌内毒素工作标准品（规格：60EU /支，中国食品药品检验研究院，批号：150601-201478）；细菌内毒素检查用水（BET水，规格：5 mL，中国食品药品检验研究院，批号：160006-201401）；鲎试剂（湛江博康海洋生物有限公司，标示灵敏度为0.25 EU·mL^-1，批号：1501071，标示灵敏度为0.125 EU · mL^-1，批号：1503101；湛江安度斯生物科技有限公司，标示灵敏度为0.25 EU·mL^-1，批号1502021，标示灵敏度为0.125 EU·mL^-1，批号1505041）。

1.2 仪器

MET-50智能恒温加热仪（天大天发科技有限公司）。

2 方法与结果 2.1 TAL灵敏度复核

用BET水溶解细菌内毒素工作标准品，稀释成2.0、1.0、0.5、0.25 λ的溶液，同时以BET水做阴性对照（NC），按《中国药典》 ^[1]对鲎试剂进行标示灵敏度复核。结果见表 1（表中“+”表示阳性反应，“－”表示阴性反应，余表同），2个厂家4批鲎试剂灵敏度均在0.5 ~ 2.0 λ范围内，灵敏度均符合规定。

2.2 内毒素限值（L）的计算

根据公式L = K · M ^{-1 [1]}，注射剂K = 5E U · (k g · h) ^-1。M为人用每千克体质量每小时最大剂量，根据说明书柴胡注射液最大剂量为4 m L，中国人均体质量按6 0 k g计算M=4 mL·(60 kg·1h)^-1=0.0667 mL·(kg·h)^-1，则L=75 EU·mL^-1。本品的限值设为每1 mL柴胡注射液中含内毒素应小于75 EU。

2.3 干扰试验最大有效稀释倍数（MVD）的确定

根据公式MVD=CL·λ^-1[1]，C为供试品溶液的浓度，L为供试品的内毒素限值，

MVD= CL·λ^-1=（1.0 mL·mL^-1×75 EU·mL^-1）/0.25（EU·mL^-1）=300。

2.4 干扰试验预试验

将供试品用BET水分别稀释10、50、100、200、300倍作为供试品系列（NPC），同时每一稀释度下均制备含有2 λ浓度细菌内毒素的溶液作为供试品阳性对照系列（PPC）。用λ为0.25EU·mL^-1的2个厂家的鲎试剂分别与2个系列溶液反应，每一稀释度作2支。BET水作阴性对照（NC），加入2 λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照（PC），从表 2可见柴胡注射液存在干扰作用，稀释200倍时，即不再对试验产生干扰。见表 2。

2.5 正式干扰试验

根据预干扰试验结果，取3批柴胡注射液用BET水稀释200倍，用该稀释液和BET水分别稀释内毒素工作标准品，配制成细菌内毒素浓度为0.5、0.25、0.125、0.0625 EU·mL^-1的系列溶液。每个浓度平行测定4管，分别与鲎试剂反应，供试品溶液和BET水做阴性对照，进行干扰试验，按公式E_s =l g^-1(∑Xs/4) 和E_t=l g^-1(∑Xt/4) 计算各系列反应终点内毒素浓度的绝对值。结果见表 3（表中E_s、E_t分别为用BET水、供试品溶液制成的细菌内毒素标准溶液反应终点浓度的几何平均值）。由表 3可见，E_s均在0.5~2.0 λ范围内，且E _t在0.5~2.0 E s范围内，按照《中国药典》 ^[1]的判断标准，柴胡注射液经200倍稀释后对TAL（λ=0.25 EU·mL^-1）与细菌内毒素之间的凝集反应无干扰作用。

2.6 样品细菌内毒素检查法的验证

取3个批号的供试品，分别用BET水稀释200倍，使用λ=0.125 EU·mL^-1的2个厂家的鲎试剂进行内毒素检查，并按要求做阳性（PPC、PC）、阴性（NPC、NC）对照，结果3批柴胡注射液的内毒素检查均符合规定，详见表 4。

3 讨论

本试验结果表明，柴胡注射液稀释200倍后对鲎试剂和细菌内毒素的凝聚反应无干扰作用，柴胡注射液采用限值75 EU·mL^-1进行细菌内毒素检查是可行的。本试验采用凝胶法检查柴胡注射液细菌内毒素，符合《中国药典》2010年版（二部）的标准，操作简便，结果准确，可以用于质量控制。