灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus (Vant.) Hand.-Mazz.的干燥全草，药用历史源于云南省文山壮族苗族自治州丘北县苗族民间验方，始载于《滇南本草》 ^[1]，1974年收入《云南省药品标准》（1974年版），从《中国药典》（1977年版）^[2]开始列入历版中国药典。灯盏细辛味辛、微苦，温，归心、肝经，具活血通络止痛、祛风散寒之功，用于中风偏瘫、胸痹心痛、风湿痹痛。20世纪70年代，经云南省药物研究所挖掘研究，分离得到有效成分灯盏花乙素，云南省药物所制药厂于1985年获批生产灯盏花素片，即为从灯盏细辛中提取的灯盏花乙素制成的单方制剂，具活血化瘀、通络止痛之功，用于治疗中风后遗症、冠心病、心绞痛属瘀血阻络证者，1997年列入《卫生部药品标准》 ^[3]。1998年、2001年和2011年，3家企业分别增加薄膜衣片；2002年和2011年，2家企业分别对质量标准进行修订提高。本研究是2014年国家评价性抽验工作中的部分内容，对灯盏花素片从有效性、物质基础、安全性方面进行较为全面的质量评价与分析。

1 现行质量标准及检验情况 1.1 现行质量标准及试验样品

灯盏花素片现行法定标准有5个：《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册（WS₃-B-2516-97）、卫生部药典委员会（98）卫典业字（98）第392号所附标准、国家药品监督管理局国家药品标准修订批件2001ZFB0102、《国家药品监督管理局国家中成药标准汇编》WS-10042（ZD-0042）-2002和国家食品药品监督管理局标准YBZ00082011。前3个标准控制项目较传统且简单，采用紫外分光光度法（UV法）测定含量；后2个标准增加了野黄芩苷的鉴别和高效液相色谱法（HPLC法）进行含量测定（注：中国食品药品检定研究院发放的野黄芩苷对照品即为灯盏花乙素）。

本研究试验样品为11家企业生产的111批次灯盏花素片，均为2014年国家评价性抽验样品，规格为每片含灯盏花乙素20 mg，涉及11家企业11个批准文号，以素片为主，占85%。

1.2 现行标准检验结果及分析

本次共检验灯盏花素片样品涉及3个法定标准：《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册WS₃-B-2516-97、卫生部药典委员会（98）卫典业字（98）第392号所附标准和国家药品监督管理局国家药品标准修订批件2001ZFB0102，检验结果全部符合规定。

重量差异结果分析：各企业的平均片重相差较大，为0.07~0.20 g/片。片重的差异与添加辅料种类无关；1家企业的片重较低，标准偏差（SD）亦较小，提示压片工艺控制较好，其余各企业片重SD集中度较差，运用“统计产品与服务解决方案”软件（SPSS软件）对数据进行相关性分析，其Pearson相关性值为-0.169，说明片重SD与片重无相关性，提示多家企业的压片工艺控制不好。

崩解时限结果分析：不同企业之间的崩解时间相差较大，最快的5 min内全部崩解，3家企业样品在10 min内全部崩解，最慢的平均崩解时间为28 min。提示各企业的制剂生产状况有明显区别。

含量测定结果分析：各企业均能按照标准要求投料，生产企业样品间差异的原因可能与原料质量有关。

2 质量评价与分析：有效性

口服制剂的吸收是起效的前提，本品原料标准规定野黄芩苷含量应在90.0%以上，灯盏花乙素较难透过细胞膜，主要通过在小肠内以被动扩散方式吸收^[4]，因此，单位时间溶出量多的片剂有更好的肠吸收，即溶出度试验是评价本品内在质量的重要指标^[5-6]。

首先选择并测定灯盏花素片在4种介质（pH值6.0、6.8、7.6及含0.75%吐温水溶液）中的溶出曲线，与参比制剂（按参比制剂相关要求选择）比较，评判各企业样品的溶出行为相似程度，围绕溶出行为的差异，从原料、辅料、工艺多个方面探究影响本品溶出行为的关键因素，同时测定样品的溶出度。

2.1 有效性评价结果 2.1.1 溶出曲线测定

灯盏花素为pH值依赖型药物，仅在pH值6~8有较好的溶解度，按相关原则^[7]，通过对溶出介质及结束时间点的选择、测定时间点选择和参比制剂选择3个预试验，筛选出溶出曲线的测定条件：pH 6.0、6.8、7.6及含0.75%吐温水溶液为溶出介质。根据预试验结果，A企业样品在4种介质中，首个时间点组的溶出度RSD比其他企业小，30 min的溶出量分别为91.7%、97.1%、85.2%和97.2%，可见A企业样品片间溶出差异较小，均一性较好；结合含量测定结果为100.4%，符合原研制剂含量97.0%~103.0%的规定，且A企业亦为灯盏花素片的原研企业。因此，选择A企业样品作为参比制剂^[8]。

采用UV法，以野黄芩苷对照品浓度和335 nm处吸光度进行线性回归并建立标准曲线。取除参比制剂外其余9家企业的素片样品作为受试制剂（后文均以B~K表示不同企业的样品），采用4种溶出介质在溶出开始后的不同时间点取样，并于335 nm处测其吸光度，代入相应的溶出介质的标准曲线方程中，计算某时间点的溶出度。采用单点法和f2相似因子法^[9-10]，进行溶出过程的比较，结果见图 1。不同企业样品在4种介质中的溶出结果见表 1。

结果与参比制剂进行比较：H、C、I样品在4种溶出介质中相似度很高；B、F样品在4种介质中相似性略差；E、G样品在3种溶出介质中相似；D、J样品在2种溶出介质中相似。

2.1.2 溶出度检查

在pH 6.8溶出介质中，桨法50转/分，30 min取样，UV法测定，溶出量不得低于75%。结果F企业的13批样品（4个批号）均低于75%。综合分析原因是与该企业所使用崩解剂的品种、数量和加入顺序有关。

2.2 有效性结果分析

本品的溶出行为在不同样品间存在差异，而溶出行为与物质的溶解性、溶解速率有关。就本品而言，相同原料的溶解性是相同的，而溶解速率与结晶体的晶型、表面积有关，与制剂的辅料、工艺有关。

2.2.1 晶型分析

对不同样品的原料分别采用显微观察、X-射线衍射测定和拉曼光谱测定，显示不同样品的灯盏花素原料晶型是相同的。表面积与结晶体的粒径呈密切负相关，经显微镜观察，制剂中灯盏花素原料针晶形状已被破坏，各企业制剂中原料的针晶大小已无明显差异，即晶型不是导致溶出行为差异的关键因素。

2.2.2 崩解时间、平均片重分析

表面积与崩解呈密切正相关。通过水与人工胃液的崩解情况考察显示：本品在人工胃液中的崩解情况好于水，崩解时间最短的是样品B，最长的是样品F，而溶出行为的结果却是2种样品的4条溶出曲线均不相似，对数据进行相关性分析，其Pearson相关性值分别为-0.449和-0.433，提示崩解与溶出行为无明显相关性。

用制剂的平均片重、辅料数分别与溶出曲线相似性进行比较分析，其Pearson相关性值分别为0.310和－0.546，提示平均片重与溶出曲线相似性不呈明显的相关性，而辅料数与溶出曲线相似性有一定相关性，且为负相关。

2.2.3 辅料类型及添加量分析

分析各样品使用辅料情况^[11]，羧甲基淀粉钠和羟丙基纤维素会对溶出度产生影响。

羧甲基淀粉钠是一种性能优良的崩解剂，若浓度过大可形成絮状物，造成药物的包裹，不利于溶出。样品B、样品I和样品H的配方中有羧甲基淀粉钠，溶出曲线显示，由于崩解较快，首个时间点的溶出量均较高；对每1000片的添加量进行分析：样品B为4 g，测定中出现絮状物，在4种介质中的溶出行为均与参比制剂不相似；样品I为3 g，测定中未出现絮状物，在2种介质中的溶出行为与参比制剂不相似；样品H为1.6 g，测定中未出现絮状物，在4种介质中的溶出行为与参比制剂均相似。提示羧甲基淀粉钠的添加量是影响溶出行为的关键因素。

羟丙基纤维素是一种粘性很大的黏合剂，制成的片剂较硬，过量会造成片剂的崩解超限，同时还具“热胶凝”的性质，妨碍药物的溶出。本次抽检样品中B样品添加了羟丙基纤维素，且处方中仅用淀粉作为崩解剂，造成崩解和溶出迟缓，与参比制剂的溶出行为均不相似。提示羟丙基纤维素的添加亦是影响溶出行为的关键因素。

2.2.4 制剂工艺分析

崩解剂的加入方法也可影响溶出行为，当崩解剂的用量相同时，采用外加法制成的片剂崩解快，崩解后形成的粒子较粗；内加法制成的片剂崩解较慢，但崩解后形成的粒子较细，比表面积大，有利于药物溶出；内、外加法制成的药片则位于两者之间。通过调研，发现处方中加入了羧甲基淀粉钠的样品B、C和J采用外加法，其余企业均采用内加法。通过对灯盏花素片的溶出度考察，崩解剂的加入方法并不是影响灯盏花乙素溶出的主要因素，崩解剂的加入量才是影响溶出的关键因素。

不同颗粒的粒径也可对溶出行为有影响。随着颗粒粒径的增大，溶出度会相应地降低。通过调研，样品A制粒控制为2~8 mm，样品H为1.5~3.0 mm，样品G为1.18~1.40 mm，样品J为1.18 mm，样品J颗粒最小，但其在4种介质中有2种溶出行为与参比制剂不相似，说明颗粒大小不是影响灯盏花乙素溶出行为的关键因素。

3 质量评价与分析：物质基础

生物活性一定是依赖于特定的物质基础。现行标准中含量测定仅控制总黄酮含量，未充分明确本品的物质基础。研究通过指纹图谱测定，确定本品的相关物质，运用植物化学方法分离单体化合物并进行结构鉴定，全面而清晰地揭示本品的物质基础。

3.1 相关物质的分离鉴定

通过指纹图谱研究，确定了本品的4种相关物质，经植物化学方法分离得到单体化合物，结构鉴定为6-羟基山奈素-7-O-D-吡喃葡萄糖醛酸、灯盏花甲素、野黄芩素和芹菜素。结果见图 2。

3.2 含量均匀性测定

所有111批灯盏花素片的含量均匀度平均值主要在86.0%~100%，全部批次的S值均＜5，A+1.80S均低于20.0，测定结果均符合规定。

含量均匀度的A+1.80S值与平均片重、重量差异检查的SD值进行比较分析，其相关性值分别为-0.190和0.014，提示含量均匀度与平均片重、重量差异均无相关性。

3.3 主成分含量测定

HPLC测定主成分野黄芩苷结果与法定标准中的UV法测定结果进行回归分析，得到回归方程为HPLC=0.98876×UV－2.913844，可决系数R²=0.954280，说明方程可以解释95.4%的变化，解释能力非常好。UV和常数项的t统计量值分别为47.70和-6.49，均可以通过1%水平的检验。综上所述，不必用HPLC法代替UV法测定含量。

3.4 特征图谱建立

对样品进行指纹图谱考察，由于主峰占总峰面积百分比在95%以上，其余色谱峰面积均较小，在相似度计算软件中权重占比太小，提示本品不适宜用指纹图谱进行质量评价。

采用特征图谱的方法对其质量进行比较和评价就更为合理，选择主成分野黄芩苷，相关物质6-羟基山奈素-7-O-D-吡喃葡萄糖醛酸、灯盏花甲素，野黄芩素作为本品的特征峰，所有样品检验均符合规定。

4 质量评价与分析：安全性 4.1 重金属及有害元素测定

根据《中国药典》 ^[12]和《关于中药中重金属、农残、黄曲霉毒素等物质限量标准草案的公示》规定，以含铅不得过5 ppm、含镉不得过0.3 ppm、含砷不得过2 ppm、含汞不得过0.2 ppm、含铜不得过20 ppm为限度，检测所有批次灯盏花素片均符合规定。

4.2 丙酮残留测定

在灯盏花素原料的制剂工艺中需要使用丙酮有机溶剂，为保证用药安全，现参考有关文献^[13-14]，采用GC法测定、GC -M S确证，样品及原料中均检出丙酮残留，原料的含量为0.0008%~0.4296%，样品中最高为0.2%，均符合《中国药典》对灯盏花素（注射用）原料中的丙酮残留不得过0.5%的规定。

4.3 大孔树脂残留测定

在灯盏花素原料的制备过程中有使用大孔吸附树脂的步骤，在树脂的生产过程中可能存在正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯等残留物^[15-16]，在应用于灯盏花素分离后，其有毒的有机物可能残留在药物中。因此对其进行残留检测。

《中国药典》规定灯盏花素（注射用）原料含苯不得过0.0002%，含正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1，2-二乙基苯均不得过0.002%。所有制剂检测结果均符合规定。

4.4 检测薄膜衣片中塑化剂的残留

参照国标GB/T 21911-2008用GC-MS法对本品17批薄膜包衣制剂的邻苯二甲酸酯类塑化剂化合物进行初筛和指认，结果均未检出邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二烯丙酯（DAP）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）和邻苯二甲酸二辛酯（DOP）8种塑化剂。

5 讨论

在溶出曲线的测定中，F样品曲线离群，综合分析原因是辅料中添加了粘性较大的羟丙基纤维素作黏合剂，而仅用淀粉作为崩解剂，造成崩解和溶出迟缓，从而导致溶出过程呈线性上升。

由此可见，辅料的品种及添加量是影响溶出行为的关键因素，即影响灯盏花素片有效性的关键是处方的设计，在确定处方的过程中，要选择合适的辅料，崩解剂和黏合剂的比例要适当。