文章摘要
解盈盈,李军,汪冰,于雅萌,栾永福,梅桂雪,张全芳,戴忠,林永强.基于DNA条形码和特异性PCR技术鉴别蚂蟥及其常见伪品[J].中国药事,2023,(1):48-58
基于DNA条形码和特异性PCR技术鉴别蚂蟥及其常见伪品
Identification of Whitmania pigra and Their Common Counterfeits Based on DNA Barcoding and the Specifi c Technique of PCR
  
DOI：10.16153/j.1002-7777.2023.01.006
中文关键词: DNA条形码  聚合酶链式反应(PCR)法  蚂蟥  混伪品  蚂蟥粉
英文关键词: 
基金项目:山东省重点研发计划重大科技创新工程项目(编号 2021CXGC010511)；山东省重点研发计划项目(编号 2020RKB24001)；山东省人文社会科学课题(编号 2021-YYGL-44)
作者单位
解盈盈 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
李军 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
汪冰 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
于雅萌 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
栾永福 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
梅桂雪 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
张全芳 山东省农业科学院生物技术研究中心应用生命科学实验室,济南 250101 
戴忠 中国食品药品检定研究院,北京 100050 
林永强 山东省食品药品检验研究院 国家药监局胶类产品质量评价重点实验室 山东省中药标准创新与 质量评价工程实验室,济南 250101 
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中文摘要:
      目的：建立蚂蟥特异性PCR鉴别方法，能够快速准确地鉴别蚂蟥与其常见伪品。方法：通过分析蚂蟥与其常见伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列，寻找蚂蟥SNP变异位点，设计特异性引物；通过对退火温度、循环次数、DNA模板量及Taq酶等关键因素的考察，确立最优反应体系及条件， 并将特异性PCR方法应用到水蛭(蚂蟥)粉末中进行药材粉末的基原鉴别，同时为保证试验结果的准确性，将PCR扩增产物进行一代测序。结果：特异性PCR结果表明蚂蟥在400~600 bp有单一明亮条带，常见混伪品则无此条带，试验结果与一代测序结果一致，为蚂蟥。结论：该方法能够将蚂蟥与其常见伪品菲牛蛭、东北小水蛭、黑条、小黑条等区别，且能鉴别水蛭(蚂蟥)粉的基原，为提升中药监管力度， 打击中药掺伪行为提供了强有力的技术支持。
英文摘要:
      Objective: To establish a specifi c PCR method quickly and accurately for identifying Whitmania pigra and its common counterfeits. Methods: By analyzing the Cytochrome Oxidase Ⅰ(COⅠ) sequences of Whitmania pigra and its common forgeries, the SNP mutation sites of Whitmania pigra were searched and specifi c primers were designed; the key factors such as the number of cycles, annealing temperature and the amount of DNA template and Taq enzyme were investigated to established the optimal reaction system and conditions. The specifi c PCR method was applied to the medicinal material primordia identifi cation of the Whitmania pigra powder. At the same time, in order to ensure the accuracy of the test results, the PCR amplifi ed products were conducted by generation sequencing. Results: The specifi c PCR results showed that there was a single bright band at 400-600 bp, while common adulterants did not have this band. The test results were consistent with the results of generation sequencing, which were Whitmania pigra. Conclusion: This method can distinguish the Whitmania pigra from its common counterfeits such as Hirudinaria manillensisis, Erpobdella octoculata, Black Bar, Little Black Bar and identify the primordium of the Whitmania pigra powder. It provides strong technical support for improving the supervision of TCM and cracking down on the adulteration of TCM.
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