文章摘要
刘春雨,于传飞,李欣,崔永霏,武刚,王兰.ActRⅡB-Fc融合蛋白生物学活性测定方法的建立[J].中国药事,2022,36(3):293-300
ActRⅡB-Fc融合蛋白生物学活性测定方法的建立
Method for Determination of the Biological Activity of ActR Ⅱ B-Fc Fusion Protein
  
DOI：10.16153/j.1002-7777.2022.03.009
中文关键词: ActR Ⅱ B  融合蛋白  生物学活性  报告基因
英文关键词: ActR Ⅱ B  fusion protein  biological activity  reporter gene
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项(编号 2018ZX09736008-006)；中山市重大科技专项(编号 210204163866513)
作者单位
刘春雨 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629 
于传飞 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629 
李欣 广州市药品检验所,广州 510160 
崔永霏 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629 
武刚 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629 
王兰 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室/国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629 
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中文摘要:
      目的：建立ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白的生物学活性检测方法。方法：利用A204-CAGA12-LUC细胞系，通过荧光素酶检测系统进行ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白的生物学活性检测，根据四参数拟合分析计算样品相对效价，并对该方法的专属性、精密性和准确性进行验证。结果：ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白在该方法中存在量效关系，且符合4-参数方程：y=(A-D)/[1+(x/C)B ]+D。该方法具有良好的专属性；6批 ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白样品经3次测定，相对效价平均值在(86.74±6.44)%~(108.81±15.07)%，RSD 均小于15 %；2批回收率样品经3次测定，回收率分别为(114.99±12.42)%和(81.19±7.35)%；8次独立测定重复性较好。结论：研究建立的ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白生物学活性检测方法专属性强，准确性高，精密度好，可作为ActR Ⅱ B-Fc融合蛋白生物学活性的常规检测方法。
英文摘要:
      Objective： To establish a method to detect the biological activity of ActR Ⅱ B-Fc fusion protein. Methods: The biological activity of ActR Ⅱ B-Fc fusion protein was determined by ONE-Glo® Luciferase Assay System with the use of A204-CAGA12-LUC cell line, and the relative potency of the samples was calculated by four-parameter fitting analysis. The developed method was validated in specification, precision and accuracy. Results: ActR Ⅱ B-Fc fusion protein shows a dose-effect ralationship in this method and it was in accordance with the four-parameter equation: y=(A-D)/[1+(x/C) B ]+D. The method has good specificity. Six batches of samples of the ActR Ⅱ B-Fc fusion protein were tested for 3 times, and the average relative potencies ranged from (86.74 ± 6.44)% to (108.81 ± 15.07)% with relative standard deviation less than 15%. Two batches of recovery samples were detected for 3 times, the recoveries of which were (114.99±12.42)% and (81.19±7.35)% respectively. The results of 8 independent determinations showed good reproducibility. Conclusion: A method for detecting biological activity of ActR Ⅱ B-Fc fusion protein has been successfully developed, which shows good specification, precision and accuracy and can be used as a routine method for biological activity detection of ActR Ⅱ B-Fc fusion protein.
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